换一批
换一批富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达
Cloning and Expression of Complete Gene for α-amylase From Enriched Metagenomic DNA
摘要利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillus sp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%.将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达栽体pSE380连接.导入Escherichia coli JM109中,IPTG诱导表达.粗酶液经Ni-NTA、Sephacryl S-200纯化后测定酶学性质:重组酶GXAA的最适作用pH为7.0,最适作用温度为75℃,对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L.构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T,其酶学性质与原始酶没有显著差别.
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