换一批
换一批S-腺苷甲硫氨酸合成酶的组成型表达、产物纯化及鉴定
Constitutive Expression,Purification and Identification of S-Adenosylmethionine Synthetase
摘要将大肠杆菌(E.coli K12)S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因克隆至质粒pBR322中,获得的重组质粒pBR322-SAMS转入大肠杆菌JM109茵株,构建了能高效组成型表达SAMS的重组茵E.coli JM109(pBR322-SAMS).将重组大肠杆菌破碎后上清液经20%～40%硫酸铵分级盐析、Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析和Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析,即可得到纯度提高5倍,比活为48.7μ/mg的SAMS,三步纯化的总回收率为62%,纯度达到92%.SAMS表达量为1176μ/L,占到菌体可溶性总蛋白的20%.重组酶的最适反应pH为8.5,4℃下在pH 7.5的缓冲液中保温10h酶活性几乎不改变.重组酶反应的最适温度为55℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃.重组酶的Km~(L-Met)为0.22mmol/L,Vmax~(L-Met)为1.07mmol/(L·h),Kin~(ATP)为0.52mmol/L,Vmax~(ATP)为1.05 mmol/(L·h).
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关键词
S-腺苷甲硫氨酸合成酶大肠杆菌组成型表达纯化酶学性质S-Adenosylmethionimesynthetase (SAMS)Escherichia coliConstitutive expressionPurificationCharacterization
主题词
腺苷(Adenosine)5-甲基四氢叶酸-高半胱氨酸S-甲基转移酶(5-Methyltetrahydrofolate-Homocysteine S-Methyltransferase)大肠杆菌(Escherichia coli)质粒(Plasmids)温度(Temperature)
分类号
TQ426.97
栏目名称
研究报告
发布时间
2010-06-07
基金项目
国家自然科学基金
中国博士后科学基金
西北工业大学青年科技创新基金
西北工业大学科技创新摹金
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