换一批带His-tag的解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2在毕赤酵母中的表达及纯化
High-level Expression and Purification of Yarrowia lipolytica Lipase Lip2 with Six Hisditine Tags in Pichia pastoris
摘要将去自身信号肽并且N-端带6×His标签的Y1Lip2基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化GS115获得高效表达脂肪酶His<,6>-Y1Lip2的基因工程菌.筛选到的阳性克隆子摇瓶发酵脂肪酶活力最高为400U/ml.对重组毕赤酵母在10 L发酵罐中表达His<,6>-Y1Lip2的分批补料发酵工艺进行了初步优化,探讨了培养基、pH、温度对生物量和重组蛋白表达量的影响.结果表明:采用FM22培养基,诱导温度为25℃,pH 5.0,甲醇诱导114 h后His<,6>-Y1Lip2的最高酶活力达到3160U/ml.SDS-PAGE分析表明,蛋白的分子量大约为38kDa.重组的His<,6>-Y1Lip2经镍柱一步纯化后的纯度达到95.43%,比酶活达到4250U/mg.
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分类号
Q814.1
栏目名称
发布时间
2011-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家"863计划"（2006AA020203;2007AA05Z417;2007AA100703;2009AA03Z232）；
教育部新世纪人才基金（NCET070336）；
湖北省自然科学基金（2009CDA046）
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