换一批miR-122过表达转基因小鼠质粒构建及其功能验证
The Construction Strategy of miR-122 Overexpression Plasmid in Transgenic Mouse Studies and Its Functional Verification
摘要目的:比较两种miR-122转基因小鼠过表达载体构建方法,为建立miR-122过表达转基因小鼠奠定基础.方法:PCR扩增长约291bp的pre-miR-122的序列,分别定向克隆到pBROAD3 -GFP载体GFP基因上游内含子或下游3'UTR区域,两种质粒分别转染293T细胞,Q-PCR检测miR-122和GFP的表达水平,并观察GFP绿色荧光.miR-122 sensor reporter是将3个miR-122成熟序列的反义序列串联克隆至psiCHECK2载体luciferase 3′UTR中,然后分别与2种miR-122过表达质粒载体共转染293T细胞,最后检测荧光素酶活性来鉴定miR-122调控功能.结果:2种构建方法的miR-122表达水平都明显增高,而只有插入到GFP基因3′UTR的质粒表达GFP功能正常.结论:构建microRNA过表达载体时,microRNA位于报告基因3′UTR区域不会影响microRNA和报告基因的功能；构建的两种miR-122过表达质粒载体都可应用到转基因小鼠研究中,而将miR-122插入到GFP下游的方法则更利于miR-122的表达.
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2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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