换一批人β2-glycoproteinⅠ及其第Ⅴ结构域蛋白的原核表达、纯化和活性鉴定
Expression, Purification and Activity Identification of Human β2-Glycoprotein Ⅰ and Domain Ⅴ
摘要目的:旨在重组表达人源β2-GPI及其第Ⅴ结构域基因,探讨后者在抗自身免疫性动脉粥样硬化实验中的干预作用.方法:以实验室保存的CTA727-1重组质粒为模板克隆β2-GPI及其第Ⅴ结构域基因,构建pET32-β2-GPI和pET32-DV重组表达载体,分别转化至大肠杆菌Rosetta-gami.经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并采用Western blot、HPTLC和ELISA方法验证了重组蛋白的活性与功能.结果:β2-GPI及其第Ⅴ结构域目的基因被分别克隆至原核表达载体pET-32a-c(+),诱导出具备CL和oxLig-1结合活性的β2-GPI及第Ⅴ结构域融合蛋白,ELISA实验显示第Ⅴ结构域融合蛋白可抑制oxLig-1/ (r) β2-GPI/Antibody免疫复合物的形成.结论:成功构建了pET32-β2-GPI及pET32-DV表达载体,获得高水平表达且具备活性的β2-GPI和第Ⅴ结构域重组蛋白,为研究治疗动脉粥样硬化等疾病的多肽药物奠定了基础.
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2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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