换一批
换一批摘要目的:以Streptomyces lividans TK24为表达宿主,构建高效表达棘白霉素脱酰酶(EchDA)的基因工程菌.方法:从Actinoplanesutahensis NRRL 12052中获取EchDA的基因片段,连接到链霉菌表达载体pNW-S1,采用诱导型启动子Plac与组成型启动子PermE*和PSau3A,依次构建基因工程菌株ZNW-S11、ZNW-S12和ZNW-S13.通过分析启动子对EchDA分泌表达的影响,确定工程菌的表达能力,随后完善发酵放大的工艺过程,将工程菌株发酵放大到300 L发酵罐水平.结果:成功实现了EchDA在S.lividans TK24中的诱导分泌表达;在摇瓶水平,EchDA的酶活可达到125U/L,在24h内可实现对15g/L米卡芬净前体FR901379的完全转化;在300L发酵罐水平,EchDA的酶活可达到80U/L,可用于10g/LFR901379的完全转化.当前,国内在工业生产中仍使用原始菌A.utahensis来表达EchDA,而开发的EchDA基因工程菌,与之相比在生产效率上有了大幅度提升,有助于改良当前棘白霉素类抗生素的生产工艺.
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关键词
变铅青链霉菌棘白霉素脱酰酶基因工程犹他游动放线菌Streptomyces lividans TK24 Echinocandindeacylase Genetic engineeringActinoplanesutahensis
分类号
Q786
栏目名称
技术与方法
DOI
10.13523/j.cb.20150110
发布时间
2015-03-27
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