换一批
换一批D194 G突变对meso-2,3-丁二醇脱氢酶催化特性的影响
Effects of D194G Mutant on meso-2, 3-Butanediol Dehydrogenase Catalytic Properties
摘要目的:比较来源于Enterobacter aerogenes CICC10293和Bacillus subtilis的meso-2,3-丁二醇脱氢酶(E.a-BDH和D194G B.s-BDH)活性和动力学参数,分析D194氨基酸对BDH催化特性的影响.方法:利用E.coli BL21(DE3)原核表达E.a-BDH和D194GB.s-BDH,经HiTrap Q FF阴离子交换柱和Superdex 75凝胶柱纯化后,用MALDI-TOF MS确定其分子质量;检测NADH/NAD+氧化还原的吸光度变化确定BDH活性、辅酶和底物的特异性、最适pH、温度及动力学参数.结果:重组表达E.a-BDH和D194G B.s-BDH是同源四聚体蛋白,基因序列有两处碱基不同(g.27A/T和g.581A/G),其中g.581A/G导致BDH的一处氨基酸发生改变(p.D194G).D194G B.s-BDH的活性约为E.a-BDH的2.3％,并且丧失了氧化meso-2,3-丁二醇的能力.二者均以乙偶姻/NADH为最适底物,但D194G B.s-BDH的Km是E.a-BDH的5.63倍.结论:D194G氨基酸突变降低了BDH的活性.
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