换一批
换一批基于CDR2和CDR3区随机突变筛选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的研究
Screening of Anti-aflatoxin B1 Single Domain Heavy Chain Antibody Based on Random Mutation of CDR2 and CDR3 Regions
摘要基于抗原·抗体特异性反应的免疫学方法是黄曲霉毒素B1的常用检测方法.为制备针对AFB1的抗体,综合参考已报道的噬菌体文库筛选的抗AFB1单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy chain antibody,VHH)序列,合成一条经密码子优化[适于大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)表达]的高同源性序列.在抗AFB1 VHH的CDR2和CDR3区引入部分随机突变,构建噬菌体抗体库.采用phage-ELISA技术,以AFB1 O-OVA为包被抗原,淘选单域重链抗体库,经过4轮筛选,获得15株能与AFB1特异性结合的阳性克隆.以结合力最高的1株克隆为材料,扩增相应的VHH基因,构建表达质粒pET-22b-VHH.在E.coli BL21(DE3)中表达VHH,经间接竞争ELISA分析,获得的抗AFB1 VHH的灵敏度约为10μg/mL.
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