换一批
换一批人组氨酸磷酸酶蛋白PHPT1的细胞定位及其对细胞层状伪足形成的影响
The Location of GFP Fused PHPT1 and Its Effect on Lamellipodia Formation
摘要目的:获取人组氨酸磷酸酶蛋白PHPT1基因,并构建其C端GFP融合的真核表达载体,通过瞬时转染观察融合蛋白在细胞内的表达和定位,并研究其定位与细胞层状伪足形成的关系.方法:以人宫颈癌细胞株HeLa cDNA为模板,PCR扩增PHPT1的全长编码基因,克隆到pEGFP-N2载体中,构建pEGFP-N2-PHPT1真核表达载体,利用脂质体将构建的载体转染到HeLa细胞中,用激光共聚焦扫描显微镜观察C端GFP连接的PHPT1的细胞定位,并进一步探讨其定位与细胞层状伪足形成的关系.结果:成功构建了PHPT1的GFP融合表达载体pEGFP-N2-PHPT1,并在HeLa细胞中检测到了融合蛋白的表达,发现其定位与细胞层状伪足的形成密切相关,并可直接影响细胞的运动能力.结论:GFP融合形式表达的PHPT1蛋白在细胞质和细胞核中均有表达,并且定位于细胞层状伪足的前沿,影响细胞层状伪足的形成,从而影响细胞运动.
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分类号
Q71
栏目名称
研究报告
DOI
10.13523/j.cb.20170603
发布时间
2017-08-24
基金项目
感谢北京优秀人才培养项目
北京友谊医院院启动项目(yyqdkt201516)对本研究的资助
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