换一批
换一批来源于红球菌胆固醇氧化酶ChOG的异源表达、纯化及催化反应结构分析
The Expression, Purification and Structural Analysis of Cholesterol Oxidase ChOG
摘要胆固醇氧化酶是胆固醇代谢过程中的关键酶,临床上用胆固醇氧化酶作为检测血清胆固醇含量的应用潜力巨大.将来源于红球菌Rhodococcus ruber的胆固醇氧化酶ChOG,分别转化到大肠杆菌宿主BL21 (DE3)和Rosetta(DE3)中,在不同条件下进行诱导表达,结果表明:BL21(DE3)菌株在诱导温度为16℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L时,ChOG可溶性表达量最高(0.49 mg/ml).ChOG的最适反应温度为30℃,最适反应pH为7.5.最适反应条件下,酶活性达到8.0 U/rmg.利用TLC、HPLC对ChOG催化产物胆甾-4-烯-3-酮进行了鉴定分析.三维结构及定点突变分析表明Glu406及Arg408、Glu261在进行胆固醇C3羟基的脱氢、质子传递,以及底物异构化方面发挥着重要作用.
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