换一批增殖细胞核抗原蛋白在Spodoptera frugiperda昆虫细胞中的表达及纯化
Expression and Purification of Proliferating Cell Nuclear Antigen in Spodoptera frugiperda Cells
摘要目的:利用昆虫细胞表达系统生产重组的人增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),并进行纯化和抗体结合特性鉴定.方法:以HeLa细胞逆转录的cDNA为模板,扩增人PCNA基因,并插入杆状病毒载体AcMNPV.利用昆虫细胞得到PCNA基因的重组杆状病毒.病毒感染细胞表达蛋白,联合镍柱亲和层析和离子交换层析获得高纯度的重组人PCNA蛋白.ELISA法测定抗体结合特异性.结果:以HeLa细胞cDNA为模板得到的基因序列同GenBank的人PCNA基因序列一致.草地贪夜蛾细胞(Spodoptera frugiperda,Sf9)表达重组人PCNA(recombinant human PCNA,rPCNA)的最佳感染值(MOI)和感染时间分别为0.05h和144h.rPCNA的产量高达110mg/L细胞,纯度＞95％.间接ELISA法检测抗体结合特性,rPCNA的敏感性和特异性分别为93.3％和85.0％.结论:建立了rPCNA的表达和纯化方法,获得了高效表达、高度抗体结合特异性的PCNA蛋白,该蛋白质能进一步开发为PCNA相关疾病的体外诊断试剂盒,具较大的应用价值.
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分类号
Q819
栏目名称
DOI
10.13523/j.cb.20180703
发布时间
2018-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31622059）；
中央高校基础研究基金（222201717019）
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