换一批组合型嵌合抗原受体的构建及分析鉴定
Construction,Analysis and Characterization of Combinvssatorial Chimeric Antigen Receptor
摘要目的:构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)及靶向上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EPC AM)嵌合抗原共刺激受体(chimeric antigen costimulatory receptor,CCR)共修饰的T细胞,并对其进行体外活性评估.方法:将EPCAM-CCR和GPC3-CAR基因片段克隆入慢病毒载体质粒,酶切、PCR和测序鉴定CCR+CAR pCDH重组载体.分离、激活和扩增人T细胞,利用慢病毒感染并筛选能够稳定表达该组合型嵌合抗原受体人T细胞.通过Western blot、流式细胞术(flow cytometry,FCM)验证CCR+CART细胞中CCR+CAR的表达,ELISA检测细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4的分泌.结果:成功构建CCR+CARpCDH慢病毒重组载体.成功分离、激活并扩增人T细胞.CCR+CAR pCDH慢病毒成功感染人T细胞,RT-PCR、Western blot检测也显示其成功表达目的蛋白,同时FCM分析显示CCR+CAR T细胞表面CCR+CAR的表达率为42％左右;ELISA检测CCR+CAR与表达GPC3和EPCAM的HepG2、Huh-7共培,其分泌更高水平的IL-2、INF-γ、IL-4,同时与人正常肝细胞L-02共培未发现CCR+CAR T细胞的有效激活.结论:成功获得组合型CCR+CAR T细胞,并初步探究其在肝癌细胞中的免疫效应,为后续动物体内免疫及实体瘤过继免疫治疗中防脱靶效应奠定基础.
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关键词
磷脂酰肌醇蛋白聚糖3上皮细胞黏附分子嵌合抗原受体嵌合抗原共刺激受体Glypican-3Epithelial cell adhesion moleculeChimeric antigen receptor(CAR)Chimeric antigen costimulatory receptor
分类号
Q812（基因工程《遗传工程》）
栏目名称
DOI
10.13523/j.cb.2211060
发布时间
2023-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
福建省自然科学基金资助项目（2020J01490）
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