换一批重组人α1-微球蛋白的毕赤酵母发酵与纯化工艺优化
Optimization of the Fermentation and Purification Process of Recombinant Human α1-Microglobulin by Pichia pastoris
摘要目的:对肾脏损伤指标蛋白人α1-微球蛋白(alpha 1-microglobulin,A1M)的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)发酵与纯化工艺进行优化,实现高纯度、高亲和性重组A1M的克级制备.方法:利用1 L摇瓶培养体系单因素实验优化A1M发酵最适pH,随后进行5 L规模化高密度发酵,优化关键补料点及发酵时间;根据A1M抗原特性建立蛋白纯化工艺并进行N-糖基化鉴定和纯度鉴定;制备A1M免疫亲和柱并进行载量评估.结果:重组人A1M毕赤酵母摇瓶发酵最适初始pH 6.0,1 L摇瓶培养体系中表达水平达888 mg/L,且糖基化程度相对最低;5 L规模发酵的48～120 h采用溶氧(dissolved oxygen,DO)≥30％反向关联甲醇补料4～6 mL/(h·L),可有效控制DO核心区＞20％;发酵48、72和96 h为关键补料点,表达水平为12.5 g/L,发酵58～78 h时空收率可达160～210 mg/(h·L),5 L罐发酵120 h批量达49 g;选用超滤浓缩、阳离子交换层析和脱盐层析柱建立A1M纯化工艺,总收率为18％;A1M抗原亲和柱偶联率达96％,偶联密度为2.46 mg/mL,对A1M绵羊多抗的载量为37 mg/mL.结论:成功建立重组人A1M抗原5 L规模的酵母发酵及纯化工艺,实现高纯度并具有免疫亲和力的A1M抗原的克级制备.
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关键词
α1-微球蛋白毕赤酵母高密度发酵糖基化修饰α1-MicroglobuliPichia pastoriHigh density fermentatioGlycosylation modification
栏目名称
DOI
10.13523/j.cb.2308026
发布时间
2024-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
北京市教育委员会科学研究计划（KM202210017010）
北京市教育委员会科学研究计划（KZ202210017025）
资助项目（15031862005/321）
:北京利德曼生化股份有限公司对本研究的支持
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