换一批耐热β-糖苷酶的基因克隆、表达和耐热性研究
Cloning and Expression of a Thermostable β-glycosidaseGene from Thermus nonproteolyticus HG102
摘要从非解朊栖热菌HG102(Thermus nonproteolyticus)染色体文库中,筛选得到耐热β-糖苷酶(Th-gly)基因.该基因位于重组质粒2.6kb HindⅢ插入片段上;并在E.coli中表达,酶比活力提高17倍.经序列测定,该基因1311bp,编码436个氨基酸,前端与部分糖透性酶基因紧密相连,G+G含量为71%,有明显的RBS序列,启动子序列不明显.经序列同源性比较,其氨基酸序列属糖苷水解酶家族1,有-N-E-P-和-T-E-N-保守序列,Glu164和Glu338推测是催化活性中心.其氨基酸组成中,疏水氨基酸含量较高(Ala 12.8%、Leu 10.9%),Arg(9.6%)、Glu(9.44%)和Pro(8.0%)含量显著较高.理论预测二级结构中,α-螺旋占41.4%,β-折叠占16.2%,β-转角占14.4%,并有大量的Pro位于β-转角的第二位.疏水作用、盐键、α-螺旋和Pro对Tn-gly的突出热稳定性有重要贡献.经系统进化树分析发现,β-糖苷酶在物种进化中比较保守.
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