应用聚合酶链式反应快速特异鉴定假单胞菌和伯克霍尔德氏菌(R)-3-羟基酯酰载酯蛋白-辅酶A转酰基酶基因
Specific Identification of ( R )-3-hydroxyacyl-ACP: CoA Transacylase Gene from Pseudomonas and Burkholderia Strains by Polymerase Chain Reaction
摘要聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类具有广泛应用前景的可降解生物塑料.因其可以以葡萄糖等廉价底物直接发酵生产PHA而日益受到重视.目前的研究表明在积累中长链PHA的假单胞菌中,由phaG基因编码的(R)-3-羟基酯酰载酯蛋白-辅酶A转酰基酶(PhaG)起关键作用,但目前为止对该蛋白还知之甚少.通过聚合酶链式反应(PCR)建立了一种快速、特异鉴定phaG基因的方法,应用该方法成功地从两株积累不同PHA的假单胞菌Pseudomonas stutzeri 1317和Pseudomonas nitroreducens0802中分别克隆得到phaG基因,并在phaG基因突变株Pseudomonasputida PHAGN-21中表达成功.同时,还首次报道了从非假单胞菌菌株Burkholderia caryophylli AS 1.2741中鉴定得到phaG基因,提示PhaG介导的中长链PHA合成途径作为一种通用的代谢模式在细菌中广泛存在,为进一步实现从廉价的非相关底物合成中长链PHA提供了必要的分子生物学基础.
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