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超耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达

Molecular Cloning and Expression of Extremely Thermostable and Acid-stable Amylase Gene in Pichia pastoris

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摘要用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因,将该结构基因引入载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-Amy转化大肠杆菌DH5α细胞,测序结果表明,克隆到的α-淀粉酶结构基因为1305bp,其编码的成熟肽为435个氨基酸.将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株.在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,超耐热酸性α-淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,随着诱导培养时间的增加,在培养基上清液中的单位体积酶活力相应上升,在诱导培养7d后酶活力达到最大值.该酶最适反应温度为90～100℃,最适反应pH值为4.5～5.5.该酶具有非常好的温度稳定性,在100℃条件下热处理5h,仍具有60%以上的酶活力.该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用.

作者郭建强 ^[1] 李运敏 ^[2] 岳丽丽 ^[2] 邱阳生 ^[1] 矫庆华 ^[1] 学术成果认领

作者单位中国科学院微生物研究所,北京,100080 ^[1] VA Medical Center 111C5,Department of Medicine University of California at San Francisco 4150 Clement Street,San Francisco,CA94121,USA ^[2]

关键词超耐热酸性α-淀粉酶激烈热球菌Pyrococcus furiosus pPIC9K质粒毕赤酵母GS115

医学主题词淀粉酶类(Amylases)基因(Genes)细胞(Cells)质粒(Plasmids)热温度(Hot Temperature)

分类号 R392.11（医学免疫学）

栏目名称

基因工程

DOI 10.3321/j.issn:1000-3061.2006.02.012

发布时间 2006-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家科技攻关计划（2001BA708B03-03）