换一批重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的表达、纯化和复性研究
Studies on the Expression,Purification and Renaturation of Recombinant N-acety-L-ornithine Deacetylase
摘要报道重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAOase)的研究进展.重组NAOase由大肠杆菌argE基因编码,在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达量为32.5%,大多以无活性的包涵体存在.低温诱导可增大有活性的可溶表达部分的比例.可溶性NAOase经Ni-NTA凝胶亲和纯化后得到SDS-PAGE电泳纯的酶,比酶活为1193.2u/mg蛋白.诱导条件影响整菌蛋白的成分及比例.37℃诱导生成的包涵体经尿素梯度洗涤后纯度较22℃高.低的蛋白浓度和合适的氧化还原体系是影响复性的关键因素.稀释法和透析法皆可使包涵体部分复性.在合适的条件下以稀释法复性时,约有17.78%包涵体可顺利复活.包涵体经尿素洗涤、溶解、Ni-NTA凝胶柱亲和纯化后,获得了高纯度的NAOase.
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分类号
Q93（微生物学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3061.2007.03.024
发布时间
2007-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点基础研究发展计划(973计划)（(2003CB7160004)）
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