换一批金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究
Preparation of Metal Chelate Affinity Chromatographic Medium and Its Application in the Purification of 6 ×Histidine-tagged Protein
摘要以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究.对纯化200 μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量,Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间,介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化.比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果,开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究,并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sephrose对CD155D1蛋白的纯化量.结果表明:对200μL细胞裂解液纯化体系,Co-CM-Asp-Sepharose(50%悬浮液)的优选体积为60μL,最佳孵育时间为30min,洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L,纯化得到融合蛋白的量约为200μg.介质用量放大为1.5mL(50%悬浮液)对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg.与商品化Ni-NTA-Agarose相比,本介质具有选择性好,清洗条件简单,得到的靶蛋白纯度高等优点.
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分类号
Q51（蛋白质）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3061.2007.05.032
发布时间
2007-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划（863计划）（2005AA205220）
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