换一批基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化
Directed Evolution of Lipase of Bacillus pumilus YZ02 by Error-prone PCR
摘要利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369.其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍.序列分析表明,突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变:T61C/C147T/A334G/T371A,其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变.通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示,3个突变氨基酸分别位于第1个α螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个β折叠之间的转角以及第5个β折叠的第1个氨基酸位置.将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadex-G75纯化后,酶学性质测定表明:突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍,Km值由8.24 mmol/L降低至7.17 mmol/L;在pH8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高.
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分类号
Q5（生物化学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3061.2008.03.016
发布时间
2008-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划(863计划)（(2006AA020203;2007AA05Z417)）
湖北省武汉市科技攻关项目（(200720422138)）
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