人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用

Establishment of Human IFN-γ in vitro Release Assay and Its Application in Tuberculosis Diagnosis

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摘要本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断.克隆表达了人IFN-γ基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体.用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到31.25 pg/mL.采集111位结核病阳性病人与292位临床健康对照者肝素抗凝全血,利用结核菌特异性抗原ESAT-6/CFP-10融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA及商品化试剂盒平行检测所有样本,结果表明两种方法的检测结果相符.结核患者的检测灵敏度为95.5%,健康对照的阳性检出率为16.7%,患者与健康对照的阳性检出率差异极显著(P<0.01),证实所建立的方法灵敏度与特异性均很高,具有良好的应用前景.

作者陈颖钰 ^[1] 邓铨涛 ^[1] 詹枝华 ^[2] 郭爱珍 ^[1] 项杰 ^[2] 陈军 ^[3] 周金海 ^[2] 曾庆志 ^[3] 杜义祥 ^[3] 魏武 ^[4] 童庆伟 ^[4] 晁彦杰 ^[5] 匡有吉 ^[1] 陈焕春 ^[1] 学术成果认领

作者单位华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室,武汉,430070 ^[1] 武汉市结核病医院,武汉,430083 ^[2] 武汉市结核病防治所,武汉,430030 ^[3] 华中农业大学校医院,武汉,430070 ^[4] 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室,武汉,430070 ^[5]

关键词结核病 IFN-γ 诊断 ELISA ESAT-6/CFP-10 单克隆抗体

主题词结核(Tuberculosis)诊断(Diagnosis)人(Persons)抗体, 单克隆(Antibodies, Monoclonal)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)

分类号 R5

栏目名称 技术与方法

DOI 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.09.023

发布时间 2008-11-18

基金项目

国家重点基础研究发展计划(973计划) 湖北省武汉市科技攻关项目 国家科技攻关项目