换一批HBD-3基因的乳腺特异性表达载体的构建及真核表达
Construction of HBD-3 gene mammary-specific expression vector and eukaryotic expression
摘要为了制备高效表迭人β-防御素-3基因的转基因奶牛提供可靠的核移植供体细胞,本试验采用RT-PCR从人胎盘组织获得人β-防御素3 cDNA,通过双酶切法将目的基因片段hBD插入到质粒pBCP之间,最后再通过双酶切法将目的片段BCD插入到真核表达栽体pEGFP-C1中,最终构建乳腺特异性表达载体pEBCD.脂质体介导法转染奶牛胎儿成纤维细胞G418,抗性筛选3-4周后,经PCR、RT-PCR扩增检测和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞;同时检测稳定转染的奶牛乳腺上皮细胞系的上清液,检测到重组人β-防御素-3蛋白可以在奶牛乳腺上皮细胞组织特异性表达.
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分类号
S8
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3061.2009.07.002
发布时间
2009-09-23
基金项目
国家高技术研究发展计划(863计划)（2004AA213072）
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