换一批定向进化-易错PCR方法提高华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的活力
Increasing activity of Rhizopus chinensis CCTCC M201021 lipase by directed evolution-error prone PCR
摘要运用定向进化-易错PCR的方法,提高了华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的活力.经过两轮易错PCR和pNPP顶层琼脂法筛选,从第一轮和第二轮突变库中分别筛选获得最佳突变株1-11和2-28.脂肪酶酶活与野生菌株相比分别提高2倍和4倍.基因比对结果表明,突变脂肪酶2-28有4个氨基酸发生了突变:A129S、K161R、A230T、K322R.蛋白质分子空间结构模拟显示,突变A129S、K161R、A230T位于脂肪酶分子表面.突变A230T增强了α-螺旋盖结构的稳定性.突变K322R处在loop上,靠近脂肪酶底物结合区域,与邻近的Asp(带负电)形成盐桥.静电引力将该loop向底物进入酶活性中心的通道口反方向牵引,使底物分子更易进入酶活性中心.酶学性质研究表明,突变株2-28脂肪酶的K_m值比出发菌株下降了10%,K_(cat)值提高为原来的2.75倍.
更多相关知识
分类号
Q5（生物化学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3061.2009.12.018
发布时间
2010-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览229
- 被引30
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
