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首页 > 生物工程学报 > 基于易错PCR的假密环菌Armillariella tabescens MAN47β-甘露聚糖酶耐高温定向进化

基于易错PCR的假密环菌Armillariella tabescens MAN47β-甘露聚糖酶耐高温定向进化

Directed evolution by error-prone PCR of Armillariella tabescens MAN47 β-mannanase gene toward enhanced thermal resistance

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摘要本研究利用易错PCR技术突变假密环菌Armillariella tabescens MAN47β-甘露聚糖酶野生型基因,PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYCα上连接,在大肠杆菌DH5α中扩增后电转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,构建了库容为10_4的初级突变体库,筛选得到耐高温最佳突变株M262.DNS法测得80℃处理30 min后最大酶活力为25 U/mL,较之野生型最适条件酶活力提高了4.3倍.序列分析表明,突变体有3个碱基发生了突变:T343A/C827T/T1139C,相应的氨基酸改变为Ser115Thr/Thr276Met/Val380Ala,利用SWISS-MODEL数据库同源建模显示,这3个突变氨基酸分别位于第4个13折叠的第6个氨基酸、第6个α螺旋的第1个氨基酸、第10个α螺旋和第11个β折叠之间的转角.

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作者 吕晓慧 [1] 胡亚冬 [1] 胡凤娟 [1] 刘大岭 [1] 姚冬生 [1] 学术成果认领
作者单位 暨南大学微生物技术研究所,广州,510632 [1]
关键词 定向进化β-甘露聚糖酶易错PCR热稳定性directed evolutionβ-mannanaseerror-prone PCRthermal stability
医学主题词 突变(Mutation)热温度(Hot Temperature)性(Sex)大肠杆菌(Escherichia coli)研究(Research)
分类号 Q1（普通生物学）
栏目名称
研究报告
DOI 10.3321/j.issn:1000-3061.2009.12.019
发布时间 2010-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省科技攻关项目（(2005B20601004)）
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