换一批过表达Nanog基因的小鼠骨髓间质干细胞对NF-κB表达的影响
Overexpression of Nanog gene in mouse mesenchymal stem cells and its influence on NF-κB expression
摘要核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的激活被认为与中枢神经系统变性疾病的进展有关.新近报告Nanog能抑制NF-κB的表达,为验证这一发现,通过限制性内切酶酶切和基因重组的方法,构建携带Nanog基因的重组慢病毒表达栽体质粒pNL-Nanog-IRES2-EGFP,经PCR检测以及测序鉴定后,在脂质体介导下与包装质粒HELPER、包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒.所获慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)后,Western blotting法检测在mMSCs中Nanog基因的表达,PCR、Western blotting和免疫细胞化学法检测NF-κB基因的表达.结果显示所克隆的Nanog基因测序结果与GenBank报道序列完全一致.构建的慢病毒载体质粒PNL-Nanog-IRES2-EGFP经Sal I和BamH I双酶切后电泳鉴定正确.所获慢病毒感染mMSCs后荧光激发mMSCs可见绿色荧光,Western blotting检测显示Nanog-mMSCs组表达Nanog,其他两组基本不表达.RT-PCR和Western blotting检测显示Nanog-mMSCs组的NF-κB表达较空载体-mMSCs组及mMSCs组低,差异有显著性意义.构建携带Nanog基因慢病毒载体并在小鼠骨髓间质干细胞中成功表达,Nanog基因的表达可抑制NF-κB表达,这结果为神经变性疾病的治疗提供了新思路.
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