换一批高通量脂肪酶稳定性测定法-ANS法的建立
Rapid and high throughput measurement of lipase thermo-stability through ANS fluorescence signal assay
摘要根据蛋白质变性后结构变化的特点和荧光探针8-苯胺基-1-萘磺酸(8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS)的特性,建立了一种快捷而准确的脂肪酶热稳定性(T<,m>)测定的新方法-ANS脂肪酶稳定性测定法,即将脂肪酶在25 ℃～455℃的不同温度下保温30min后,加入到ANS反应体系(0.2mg/mL酶蛋白,0.05mmol/LANS,20mmol/LTris-HCl(pH 7.2),100～500 mmol/L NaCI)中.在激发波长378 nm,发射波长465 nm下测定荧光值.通过GraphPad Prism软件分析得出脂肪酶的T<,m>.利用该方法测定了野生型扩展青霉脂肪酶及其突变体的T<,m>值,结果与传统的NaOH滴定和平板透明圈法的测定结果相似.同时,利用该方法可在96孔板上快速完成数十个样品的T<,m>测定,从而成为一种快速、可靠、可用于高通量的酶稳定性的测定方法.
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