换一批
换一批敬钊毒素-XI与突变体R3A-JZTX-XI的合成、复性及其药理活性鉴定
Synthesis,refolding and identification of pharmacological activities of neurotoxin JZTX-XI and R3A-JZTX-XI
摘要表达于β-胰岛细胞上的Kv2.1钾通道电流负责动作电位的复极化,从而调节胰岛素的分泌,是治疗2型糖尿病的有效作用靶点.敬钊毒素-XI(JZTX-XI)是从敬钊缨毛蛛Chilobrachys jingzhao粗毒中分离纯化到的一种新型的肽类神经毒素,能够抑制非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv2.1钾通道电流.为了研究JZTX-XI的结构与功能关系,用芴甲氧羰基(Fomc)固相多肽合成方法合成了野生型JZTX-XI和突变体R3A-JZTX-XI,结合反相HPLC和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行检测,从而得到合成多肽的最佳氧化复性条件.复性产物经质谱测定其相对分子质量与理论分子质量相符.复性JZTX-XI与天然毒素等量混合后用高效液相色谱分析也只得到单一峰.膜片钳电生理活性分析结果显示,JZTX-XI对瞬时表达于HEK293T细胞的钾通道亚型hKv2.1和钠通道亚型hNavI.5电流具有非常强的抑制作用,其半数有效抑制浓度(IC50)分别为95.8 nmol/L和437.1 nmol/L.当第3位Arg被Ala取代后,突变体R3A-JZTX-XI对同样表达的hKv2.1和hNav1.5通道电流的IC50值分别为1.22μmol/L和1.96 μmol/L.以上实验结果表明突变体R3A-JZTX-XI对hKv2.1和hNav1.5通道的抑制活性分别比天然JZTX-XI降低了12.7倍和4.5倍,说明第3位的Arg残基既是负责JZTX-XI与hKv2.1通道相互作用的关键活性残基,也是与hNavl.5通道活性相关的氨基酸残基.目前的研究结果对研发胰脏钾通道Kv2.1的分子探针和以Kv2.1通道为靶点的药物设计具有借鉴作用.
更多相关知识
分类号
R96
栏目名称
医学与免疫生物技术
发布时间
2011-08-24
基金项目
国家重点基础研究发展计划(973计划)
国家高技术研究发展计划(863计划)
湖南省自然科学基金
教育部新世纪优秀人才支持计划
国家自然科学基金
湖南省研究生科研创新项目
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