换一批
换一批优化的反向PCR结合TAIL-PCR法克隆棉花线粒体atpA双拷贝基因及其侧翼序列
High efficiency genome walking method for flanking sequences of cotton mitochondrial double-copy atpA gene based on optimized inverse PCR and TAIL-PCR
摘要双拷贝基因及其侧翼序列的克隆是分子生物学中的一个难点.将优化的反向PCR (Inverse PCR,iPCR)与TAIL-PCR相结合,有效地克隆双拷贝基因及其侧翼序列.先用Southern blotting方法确定一种能获得合适长度片段的限制性内切酶,然后用优化的iPCR方法对该酶切产物进行自连和扩增,将2个拷贝的侧翼序列区分开.根据iPCR结果,进一步用TAIL-PCR扩增更远侧翼的序列.利用这套方法,获得了棉花可育胞质和不育胞质线粒体双拷贝atpA基因的所有EcoRI限制片段(2.2～5.1 kb)和HindⅢ限制片段(8.5～11.7 kb),克隆到2个拷贝各自的侧翼序列.研究结果说明,优化的iPCR与TAIL-PCR相结合是克隆双拷贝基因及其侧翼序列的一种高效方法.
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2012-04-20
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