换一批K5裂解酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质分析
Expression, purification and characterization of K5 lyase in Escherichia coli
摘要K5多糖裂解酶(Elma)能够裂解半合成肝素的底物-K5多糖,裂解产物是半合成法生产低分子量肝素的底物.利用PCR方法扩增elma,构建表达载体pET-28a-Elma,将构建好的质粒转化至大肠杆菌BL21中,以0.2 mmol/L的IPTG在16℃诱导5h实现了高效表达,SDS-PAGE分析表明Elma表达量可达菌体总蛋白的30％以上.采用Ni2+-NTA亲和层析法和G-75分子筛层析纯化目的蛋白,其纯度大于95％.通过PAGE多糖电泳发现裂解前后的K5多糖分子量有明显的减小.根据Elma裂解产物产生双键从而在232 nm处有吸光度的变化来测Elma的酶活.其最适反应温度为37℃,反应的最适pH值为7.0.底物特异性分析发现Elma除K5多糖外对肝素和透明质酸也有降解作用.
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医学主题词
大肠杆菌(Escherichia coli)肝素(Heparin)蛋白(Egg White)肝素, 低分子量(Heparin, Low-Molecular-Weight)方法(Methods)
分类号
Q81（生物工程学《生物技术》）
栏目名称
发布时间
2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中央高校基本科研业务费专项（JUSRP111A50）
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