换一批TAT-Cytoglobin融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性分析
Expression, purification, and characterization of fusion protein TAT-Cytoglobin
摘要旨在利用细胞穿膜肽TAT的穿膜作用和细胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)的抗衰老、抗纤维化的功能,将二者通过基因工程的手段融合在一起,以期获得能够穿透细胞屏障的Cygb.通过两次重叠PCR技术获得了TAT-Cygb DNA,将其插入原核表达载体pET22b质粒中,转化至大肠杆菌BL-21,筛选出可表达TAT-Cygb融合蛋白的大肠杆菌工程菌株.经乳糖诱导表达TAT-Cygb,CM阳离子交换层析(CM Sepharose Fast Flow Protocol)获得纯度高达95％的TAT-Cygb融合蛋白,分子量约23 kDa.生物活性实验显示,TAT-Cygb过氧化物酶比活力达到(422.30±0.36) U/mg.TAT-Cygb预处理的Hacat细胞可免受H2O2氧化应激的损伤(RGR=100％),同时TAT-Cygb可治疗已被H2O2氧化损伤的细胞(RGR=98％),与Cygb处理组相比具有显著差异(RGR=79％).该研究首次成功利用大肠杆菌表达系统表达了可穿透细胞膜的、有生物活性的TAT-Cygb融合蛋白,为继续开展Cygb在抗衰老、抗纤维化和抗癌领域的研究奠定了基础.
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关键词
细胞穿膜肽细胞珠蛋白融合蛋白纯化氧化应激cell-penetrating peptides cytoglobin fusion protein purification oxidative stress
栏目名称
DOI
10.13345/j.cjb.130573
发布时间
2014-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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