一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞生产Ad-IFNγ的工艺

Producing Ad-IFN gamma by suspension culture of HEK293 cells in a disposable bioreactor

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摘要腺病毒载体是极具发展前景的基因治疗载体之一,为获得一条新型腺病毒规模化生产工艺,研究采用5L振荡激流式一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞来生产重组腺病毒载体.细胞经种子链逐步扩增后,接种至AP10生物反应器,采用CD293无血清培养基流加培养悬浮HEK293细胞,细胞密度达约2.0×106个/mL时,以30 MOI (Multiplicity of infection)感染重组Ad-IFNγ(Recombinant adenovirus-interferon gamma),48 h后收获细胞,3次冻融裂解离心收获上清病毒粗产品.采用壳蛋白免疫法快速测定粗产品滴度.结果表明,采用振荡激流式一次性生物反应器,流加HEK293细胞悬浮培养6d,密度可达2.0×106个/mL,Ad-IFNγ粗产量达1.49× 1013 IFU (Infectious unit),单细胞包装量达3 800 IFU/cell.采用阴离子交换层析法纯化重组腺病毒,回收率35.9％.建立了利用5L激流式一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞生产重组腺病毒载体Ad-IFNγ的初步工艺.

作者吴全德 ^[1] 黄文林 ^[2] 学术成果认领

作者单位中国科学院微生物研究所,北京 100101 ^[1] 中国科学院微生物研究所,北京 100101;中山大学附属肿瘤医院,广东广州 510010;广东省肿瘤靶向治疗新药研发企业重点实验室,广东广州 510663;广东省发展和改革委员会基因药物工程实验室,广东广州 510663;广州达博生物制品有限公司,广东广州 510663 ^[2]

关键词重组腺病毒 HEK293细胞悬浮培养一次性生物反应器分离纯化阴离子交换层析 adenovirus vectors suspension culture of HEK293 cell disposable bioreactor purification anion-exchange chromatography

主题词细胞(Cells)生物反应器(Bioreactors)工艺学(Technology)阴离子(Anions)感染(Infection)

栏目名称 生物育种与工艺优化

DOI 10.13345/j.cjb.140119

发布时间 2015-01-07