换一批重组人隐花色素蛋白Ⅰ的表达纯化及其在制备放疗保护剂中的应用
Expression, purification of recombinant human cryptochrome I and its application in preparation of protective agent for radiotherapy
摘要放疗是治疗肿瘤的最常用手段之一,为寻找能够保护肿瘤组织周边正常细胞的放疗保护剂,通过原核表达质粒的构建,利用大肠杆菌BL21 (DE3)诱导并成功表达出人隐花色素蛋白Ⅰ(hCRV1).采用包涵体溶解、梯度透析复性、镍柱亲和纯化以及超滤浓缩的蛋白纯化工艺,1L菌液可收获10-15 mg纯度超过95％的hCRY1.在HaCaT细胞中通过细胞DNA损伤修复中所产生的H2A.X foci荧光强度的定量检测,验证了纯化所得的hCRY1具有射线损伤防护功能;通过对经过hCRY1以及对照蛋白处理后的细胞凋亡情况的检测排除了hCRY1的毒副作用对H2A.X foci荧光强度的影响.这些为进一步研究hCRY1提供了便利条件,也为将hCRY1开发成为新的放疗保护剂提供了理论基础.
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关键词
生物节律包涵体梯度透析镍柱亲和纯化DNA损伤HaCaTH2A.X foci免疫荧光biological rhythm inclusion bodies gradient dialysis Ni-NTA DNA damage HaCaT H2A.X fociimmunofluorescence
栏目名称
DOI
10.13345/j.cjb.140169
发布时间
2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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