换一批
换一批重组β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性的半理性改造
Semi-rational modification for improving bond selectivity of recombinant β-glucuronidase
摘要为了提高Escherichia coli重组表达的β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)的键选择性,本研究以PGUS-E结构与功能关系的推测为指导,选择了可能影响PGUS-E的键选择性的R329、T369、N467位点进行定点饱和突变,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对键选择进行筛选,得到优势突变酶R329K、T369V.结果显示:与PGUS-E酶相比,突变酶R329K、T369V键选择性分别提高26.9％、34.3％.突变酶的酶学性质研究表明,突变酶的最适pH和温度与PGUS-E一致,但其酶催化效率下降.由此可见,R329、T369对酶催化的键选择性和酶的活性有显著影响.综上结果,本文应用饱和突变方法改善了PGUS-E的键选择性,为酶的结构和功能关系理解提供了实验依据.
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关键词
β-葡萄糖醛酸苷酶单葡萄糖醛酸基甘草次酸键专一性定点饱和突变β-glucuronidaseglycyrrhetinic acid monoglucuronidebond selectivitysite-saturation mutagenesis
栏目名称
研究报告
DOI
10.13345/j.cjb.140595
发布时间
2015-09-11
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