一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法

A method to increase the production of insulin precursor in Pichia pastoris

摘要为了提高胰岛素前体(PI)的产量,构建了pPIC9K-PI表达载体并电转化至毕赤酵母菌株GSll5中,在浓度为4.0 mg/mL的G418抗性平板上筛选到了1株拷贝数为12的菌株CL012.将SNAREs(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子受体蛋白)组分中的SNC2和SNC2-SSO2分别转入菌株CL012中,并在摇瓶和5L发酵罐水平上检测SNAREs对PI产量的影响.结果表明:摇瓶水平上,甲醇诱导96 h后,菌株CL012的PI产量为1.53mg/L;表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别为1.89 mg/L和2.21 mg/L,分别比菌株CL012提高了23.53％和44.44％.在5L发酵罐上进行高密度发酵,甲醇诱导96 h后菌株CL012的PI产量为53 mg/L,是摇瓶水平的34.64倍;表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别达到64 mg/L和78 mg/L,分别比菌株CL012提高了20.75％和47.17％.由此得出结论SNAREs可以促进胰岛素前体的分泌,从而提高在毕赤酵母中的异源表达.

作者梁晨晨 ^[1] 王立 ^[1] 罗秋玲 ^[2] 吴静 ^[3] 学术成果认领

作者单位江南大学药学院,江苏无锡214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡 214122 ^[1] 江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡,214122 ^[2] 江南大学药学院,江苏无锡,214122 ^[3]

关键词毕赤酵母胰岛素前体 SNAREs 异源表达 Pichia pastoris insulin precursor SNAREs heterologous expression

主题词毕赤酵母(Pichia)胰岛素(Insulin)方法(Methods)发酵(Fermentation)甲醇(Methanol)

栏目名称 生物技术与方法

DOI 10.13345/j.cjb.170012

发布时间 2017-08-28

基金项目

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