双反相色谱串联平行反应监测靶向定量蛋白质组方法的建立

Establishment of dual reverse phase chromatography combined parallel reaction monitoring for targeted quantitative proteomics

摘要近年来质谱技术的持续进步促进了靶向蛋白质组的发展,在多反应监测(Multiple reactionmonitoring,MRM)靶向蛋白质组定量方法的基础上衍生出平行反应监测(Parallel reaction monitoring,PRM)技术.该技术靶向定量灵敏度和通量更高,重现性也更好,但其对于高复杂性样本在定量速度和深度上均存在一定的局限性.改善PRM定量的色谱方法包括:色谱柱的优化,增加色谱柱内径、降低柱长;色谱洗脱条件的优化,提高液相洗脱流速、缩短洗脱时间;最终建立了一种简单高效的双反相色谱串联PRM靶向蛋白质组定量平台.该平台使用150 μm内径和8 cm长的短色谱柱,在800 nL/min的高流速下和35 min有效洗脱梯度内,可实现对293T全细胞裂解液蛋白样本中多达400条低丰度肽段的快速定量.该研究优化了PRM靶向定量方法,将有利于PRM技术的推广,尤其为低丰度蛋白的精准定量提供了一种技术选择.

作者李恺 ^[1] 宋雷 ^[2] 石文昊 ^[2] 田喜凤 ^[3] 学术成果认领

作者单位华北理工大学基础医学院病原生物学学科,河北唐山063009;军事医学科学院放射与辐射医学研究所国家蛋白质科学中心·北京北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室,北京102206 ^[1] 军事医学科学院放射与辐射医学研究所国家蛋白质科学中心·北京北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室,北京102206 ^[2] 华北理工大学基础医学院病原生物学学科,河北唐山063009;河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室,河北唐山 063000 ^[3]

关键词双反相色谱平行反应监测靶向定量 dual reverse phase chromatography parallel reaction monitoring (PRM)targeted quantification

主题词蛋白质组(Proteome)方法(Methods)性(Sex)蛋白(Egg White)时间(Time)

栏目名称 生物技术与方法

DOI 10.13345/j.cjb.170035

发布时间 2017-12-25

基金项目

National Natural Science Foundation of China (No.31471954).国家自然科学基金