利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体

Preparation of anti-hCG single domain antibody by antibody grafting technique using an antigen-binding peptide

摘要本研究旨在人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 的结合多肽的基础上应用嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体,简化单域抗体制备过程,提高多肽生化稳定性.利用单域抗体通用骨架 (cAbBCII10),以 hCG 结合多肽取代互补决定区CDR1或CDR3,合成cAbBCII10嫁接抗体全基因序列并与sfGFP基因序列融合后,插入到带有His标签的原核表达载体pET30a(+) 中,成功构建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sfGFP与pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP融合蛋白表达质粒.将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白,得到高表达量的可溶性融合蛋白.利用Ni-NTA亲和柱纯化得到纯蛋白,应用SDS-PAGE鉴定纯化的蛋白为正确表达的目标蛋白.通过抗原抗体结合实验,发现 hCG 结合多肽嫁接到单域抗体通用骨架的互补决定区CDR1或CDR3后都有抗原结合活性,具有相似的抗体滴度,且嫁接到CDR3后的抗原结合活性比CDR1要高(2-3倍).嫁接抗体基本保留了所用单域抗体框架较为稳定的生化特性,具有一定的热稳定性和较好的碱耐受性,同时,所接入的hCG结合片段对hCG具有较特异的结合活性,为进一步优化抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体提供了可靠的实验基础.