换一批
换一批摘要构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件.通过PCR技术扩增HIV-1 (NL4-3 毒株)CAP2NC 基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC.SDS-PAGE 结果表明,重组蛋白CAP2NC可在大肠杆菌可溶高效表达,经纯化后纯度约为95％.ELISA 检测表明重组蛋白CAP2NC 可被HIV-1 衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别,具有较好反应活性.重组蛋白透析后在非原性SDS-PAGE中呈现为多种聚体形式.分子筛排阻层析分析CAP2NC蛋白透析后可进行组装,负染电镜进一步观察显示CAP2NC蛋白在RNA 存在条件下,可形成空心管状颗粒,其形态结构与HIV-1 病毒衣壳体外自组装形成的类似.上述结果表明HIV-1 CAP2NC 蛋白具有体外自组装的性质,为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础.
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栏目名称
生物技术与方法
DOI
10.13345/j.cjb.170380
发布时间
2018-08-27
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