换一批裂殖壶菌高产油突变体的高通量筛选
Screening for hyper-accumulating lipid mutants in Aurantiochytrium limacinum using high-throughput fluorescence-based method
摘要二十二碳六烯酸(DHA)具有促进婴幼儿大脑和视网膜发育等多种生理功能,被广泛应用于食品、医药和养殖等行业.为了获得适合于工业化生产的高产油、高产DHA的裂殖壶菌工程株,文中建立了一套操作简单、快速准确的基于尼罗红染色的高通量筛选方案.首先利用紫外线(UVC)诱变的方式快速构建裂殖壶菌的随机突变体库.然后采用优化后的筛选条件如裂殖壶菌的最佳尼罗红染色条件(二甲基亚砜浓度为20％,尼罗红终浓度为2.0 μg/mL,孵育时间为10 min,孵育温度为40℃)和更合理的筛选依据(多功能酶标仪实现高通量测量的单位细胞密度油脂量)等,对3 648株突变体进行筛选,得到了3株高产油突变体(D03432、D05106和D01521).摇瓶发酵实验表明,这3株突变体在生物量、油脂含量和DHA产量上均高于野生型菌株,其中突变体D03432和D05106的油脂量分别达到了干重的64.74％和63.13％,远高于野生型菌株的43.19％.而且这两株突变体的DHA产量分别是野生型菌株的2.26倍和2.37倍.最后,对突变体D03432和D05106进行了5L发酵罐发酵培养,相较于野生型菌株,这两株突变体不仅生物量和油脂含量有所增加,而且DHA产量更是分别增加了45.51％和66.46％,展现出较好的工业应用潜力.此外,本筛选方案对其他产油微生物高产油突变体的高通量筛选具有借鉴作用.
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医学主题词
突变(Mutation)高通量筛选分析(High-Throughput Screening Assays)二十二碳六烯酸类(Docosahexaenoic Acids)选育(Selective Breeding)发酵(Fermentation)
栏目名称
DOI
10.13345/j.cjb.190086
发布时间
2019-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖北省技术创新专项重大项目（No.2016ABA120）
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