胰岛素瘤相关蛋白-2在HEK293中的重组生产及抗原性分析

Production and antigenicity analysis of a recombinant insulinoma associated protein-2 in HEK293 cells

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摘要胰岛素瘤相关蛋白-2(insulinoma-associated protein-2,IA-2),是属于酪氨酸磷酸酶样蛋白家族的跨膜糖蛋白,也是诊断 1 型糖尿病的重要自身抗原,相关产品已在欧美国家上市.目前,商业化的IA-2 抗原主要为重组IA-2ic结构域,或从牛胰岛中天然提取的IA-2,其中重组IA-2 抗原在临床上存在弱阳性漏检的问题,无法完全替代天然提取IA-2 抗原.本研究利用HEK293 表达系统探究IA-2 的重组生产.通过瞬时表达IA-2 的第 449?979 位氨基酸跨膜片段(IA-2 transmembrane fragment,IA-2 TMF)这一天然形式的膜蛋白,并优化表达条件和膜蛋白溶解条件,纯化后膜蛋白得率为 0.78 mg/L细胞发酵液.随后,通过酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),对比IA-2 TMF与RSR rhIA-2 的抗原活性,检测了 77 位 1 型糖尿病患者血清和 32 位健康志愿者血清,测试的结果通过接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)表征敏感性和特异性.结果表明:IA-2 TMF的敏感性为71.4%(55/77),而RSR rhIA-2的敏感性为63.6%(49/77),2 种抗原特异性均为 100%.2 种抗原在特异性上无明显差异,而IA-2 TMF的敏感性略优于进口金标RSR rhIA-2 抗原.综上所述,本研究基于HEK293 重组表达的IA-2 TMF能够作为 1 型糖尿病体外诊断试剂开发的原料.