miR-23b-3p通过靶向PDE4B基因调控山羊肌内前体脂肪细胞的分化
miR-23b-3p regulates the differentiation of goat intramuscular preadipocytes by targeting the PDE4B gene
摘要本研究旨在明确 miR-23b-3p 对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响,并确定这种作用是通过靶向基因 PDE4B 来实现的.基于实验室前期转录组测序结果,以筛选得到的山羊肌内脂肪细胞分化前后差异表达的 miR-23b-3p 为切入点,利用实时荧光定量 PCR(real-time quantitative-polymerase chain reaction,qPCR)技术检测miR-23b-3p在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式,从形态学水平和分子水平确定 miR-23b-3p 对脂肪分化及脂肪分化标志基因的影响;利用生物信息学预测以及双荧光素酶报告基因试验确定 miR-23b-3p 的下游靶基因,明确miR-23b-3p 与预测靶标基因的靶向关系.结果表明,过表达 miR-23b-3p 后山羊肌内脂肪细胞脂滴积聚减少,成脂标志基因 AP2、C/EBPα、FASN、LPL 表达水平极显著下调(P<0.01),C/EBPβ、DGAT2、GLUT4 和PPARγ 的表达水平显著下调(P<0.05).干扰 miR-23b-3p 表达后,山羊肌内脂肪细胞中脂滴积聚增多,ACC、ATGL、AP2、DGAT2、GLUT4、FASN和SREBP1 表达水平极显著上调(P<0.01),C/EBPβ、LPL 和 PPARγ 的表达水平显著上调(P<0.05).通过生物信息学分析预测,PDE4B可能为miR-23b-3p的靶标基因,且过表达miR-23b-3p后极显著降低PDE4B的mRNA表达水平(P<0.01),干扰miR-23b-3p后PDE4B的mRNA水平得到了显著提升(P<0.05).双荧光素酶报告基因试验结果表明,miR-23b-3p与PDE4B基因存在靶向关系.miR-23b-3p通过靶向PDE4B基因调控山羊肌内前体脂肪细胞的分化.
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