换一批摘要假尿苷是非编码RNA中含量最多的修饰核苷,在生物和医药领域用途广泛.现有的假尿苷制备方法普遍存在步骤繁琐、生产效率低、生产成本高等缺点.本研究在大肠杆菌中设计了新颖的酶级联反应路线,并实现了全细胞催化尿苷制备假尿苷.首先,质粒过表达内源的假尿苷-5-磷酸糖苷酶、核糖激酶和核糖核苷水解酶,构建出尿苷到假尿苷的代谢途径,实现了假尿苷的积累;然后,筛选内源的高活性核糖核苷水解酶,促进了尿苷的水解,为假尿苷的合成提供了更多前体;接着,对底物与产物的转运途径进行改造,提升假尿苷产量的同时避免了副产物尿苷的积累.最终获得的重组菌株Ψ-7在24 h内可以全细胞催化30 g/L尿苷产生27.24 g/L假尿苷,转化率为90.8％,生产效率为1.135 g/(L·h),假尿苷产量和生产效率为现有酶催化法报道的最高值.
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关键词
假尿苷大肠杆菌全细胞催化假尿苷-5-磷酸糖苷酶核糖激酶核糖核苷水解酶pseudouridineEscherichia coliwhole-cell catalysispseudouridine-5-phosphase glycosidaseribokinaseribonucleoside hydrolase
栏目名称
DOI
10.13345/j.cjb.230484
发布时间
2024-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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