换一批乙烯受体ETR1-GAF的功能化制备及其对抑制肽NOP-1的结合鉴定
Functional reconstitution of the ethylene receptor ETR1-GAF and characterization of its binding with the inhibitory peptide NOP-1
摘要乙烯是调控植物生长发育与环境应答的关键气态激素,乙烯信号传导的识别过程始于细胞膜上的乙烯受体蛋白.ETR1(ethylene response 1)是植物中重要的乙烯受体,其GAF结构域在介导与下游信号蛋白EIN2(ethylene insensitive 2)的相互作用中发挥核心作用.目前,乙烯受体蛋白与下游元件的相互作用研究仍缺乏高通量、快速的检测体系,限制了对其识别机制的深入解析.本研究利用毕赤酵母表达系统,表达并纯化了ETR1 的跨膜结构域和GAF结构域,通过去垢剂Fos-14 增溶提取,并采用Anti-Flag抗体与Ni-NTA亲和层析两步纯化策略,成功获得高纯度、具有结构完整性的ETR1-GAF蛋白.圆二色谱分析表明ETR1-GAF在溶液中主要以α-螺旋构象存在,进一步基于生物膜干涉技术(bio-layer interferometry,BLI),对不同浓度抑制肽NOP-1与ETR1-GAF蛋白进行动力学结合测定,结果表明ETR1-GAF与NOP-1 肽段之间存在高亲和力、浓度依赖性的特异性结合,其平衡解离常数(equilibrium dissociation constant,KD)为(6.885×10-5±7.944×10-6)mol/L,R2=0.991 4.本研究成功建立了一种稳定、可定量的乙烯受体蛋白体外互作分析系统,为在分子水平深入研究乙烯信号传导中受体与下游元件的动态识别机制提供了关键工具,也为后续探索乙烯信号网络的蛋白质互作谱及开发新型调控策略奠定了方法学基础.
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关键词
乙烯受体膜蛋白ETR1-GAF抑制肽NOP-1生物膜干涉技术ethylene receptormembrane proteinsETR1-GAFinhibitory peptide NOP-1bio-layer interferometry
栏目名称
DOI
10.13345/j.cjb.250683
发布时间
2026-02-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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