换一批摘要为制备高特异性和亲和力的 EGFP 单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),本研究以纯化的 EGFP 蛋白为抗原,经弗氏佐剂乳化后免疫 Balb/c 小鼠,将小鼠脾细胞与 SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合,应用间接 ELISA 方法筛选阳性孔并利用有限稀释法进行亚克隆,获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株.采用叠加试验、亚型鉴定、Western blotting 及表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,系统分析抗体的表位特异性、反应性及亲和力.结果发现,本研究成功筛选出 2 株能稳定分泌特异性针对 EGFP 蛋白单抗的杂交瘤细胞株 1F11 和 3C11,其亚型分别为 IgG2a 和 IgG2b;叠加试验显示叠加系数(additivity index,AI)大于 40%,说明两者识别不同抗原表位;抗体效价检测发现效价均可达 1:512 000;Western blotting 分析证实其可特异性识别大小约为 27 kDa 的 EGFP 蛋白;SPR 分析测得亲和力常数分别为 3.806×10-10 mol/L 和 2.631×10-10 mol/L,均属于高亲和力水平.由此可见,本研究制备的 mAbs 具有良好的特异性、反应性及高亲和力,为 EGFP 标记蛋白的免疫学检测及疫苗株体内监测提供了特异性的重要生物工具.
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关键词
EGFP蛋白细胞融合单克隆抗体亲和力表面等离子共振EGFP proteincell fusionmonoclonal antibodyaffinitysurface plasmon resonance
栏目名称
DOI
10.13345/j.cjb.250532
发布时间
2026-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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