换一批HIV抗原抗体化学发光免疫检测方法的建立及优化
Establishment and Evaluation of a Two-Step Microplate Chemiluminescence Immunoassay to Detect HIV-1/2 Antibody and P24 Antigen
摘要目的:建立并优化HIV抗原抗体化学发光免疫检测方法(CLIA).方法:采用化学发光免疫的方法,通过对包被条件、HIV酶用量、反应加入量、反应时间和温度等反应参数进行优化,建立HIV抗原抗体联合检测方法,使用HIV国家参考品评价所建立方法的准确性.结果:包被比例取HIV-1抗原1:5000、HIV-2抗原1:10000、HIV P24单抗1:2000;检测酶比例取Biotin-P24多抗1:2000;HRP-HIV-1抗原1:5000、HRP-HIV-2抗原1:20000、SA-HRP 1:4000;待测样本75μL/孔;第一步反应温度和时间分别为37℃和60 min,第二步反应温度和时间分别为37℃和30 min,为检测方法的较佳反应条件.检测国家参考品结果表明,阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、灵敏度和精密性均符合国家参考品标准要求.结论:成功建立了特异、灵敏的HIV抗原抗体化学发光免疫检测方法,为在临床上推广应用提供了科学依据.
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