换一批摘要目的:链球菌蛋白G(Streptococcus Protein G,SPG)是一种能够和多种哺乳动物的IgG相结合的蛋白质,广泛用于重组蛋白和抗体的纯化,目前市场产品主要为His-SPG,本研究拟采用类泛素蛋白修饰分子(Small Ubiquitin-Like Modifier,SUMO)融合表达SPG,以提高SPG产量,降低纯化柱料的生产成本.方法:将SPG基因分别连接至pET28a和pSmart Ⅰ质粒,经大肠杆菌重组表达两种蛋白,并比较产量、纯度和活性的差异.结果:His-SUMO-SPG产量为12.5 mg/L,较His-SPG(8.4 mg/L)提高约49%;包被两种SPG于96微孔板作为固定相,检测其捕获兔多抗和鼠单抗能力,His-SUMO-SPG的检测信号(OD450)较His-SPG更高,具有更高载量;生物素化His-SPG对小鼠的IgG1、IgG2a、Ig2b以及兔IgG最低检测浓度分别为0.703 pmol/L、0.098 pmol/L、0.524 pmol/L和 0.927 pmol/L,生物素化His-SUMO-SPG最低检测浓度分别为 0.887 pmol/L、0.084 pmol/L、0.667 pmol/L和0.865 pmol/L,两种SPG最低检出限接近.结论:His-SUMO-SPG和His-SPG在检测性能方面比较接近,His-SUMO-SPG结合IgG载量略高于His-SPG,且His-SUMO-SPG产量更高,SUMO融合表达蛋白G方法为工业大规模生产提供了一种有效策略.
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关键词
链球菌蛋白GSUMO融合表达大肠杆菌活性表征Streptococcal Protein GSUMO fusion expressionE.coliactivity characterization
分类号
R574（消化系及腹部疾病）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2096-0387.2023.06.023
发布时间
2024-01-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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