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一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达

Overexpression of Mitochondria DNA Encoded Genes in Human Esophageal Carcinoma Cell Line Induced by Nitric Oxide

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摘要以人食管癌细胞系EC109作为驱赶方(driver),以被一氧化氮(nitric oxid,NO)诱导的EC109作为实验方(tester),应用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况.然后对过表达基因的表达序列标签(expressed sequence tag,EST)实施序列测定,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析.结果先后两次从69个SSH阳性克隆中共鉴定出6个线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)编码的基因,即ND-4L、ND-4、COX-2、Lys-tRNA、ATP-8和ATP-6.表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达.另外,在ND-4L/ND-4基因的片段(10 736～11 449)上发现了三处同型单核苷酸置换(10 872 T→C, 11 001 A→G, 11 346 A→G),在COX-2/Lys-tRNA/ATP-8/ATP-6基因片段(8 011～8 589)上发现了一处单核苷酸缺失(8 380 A).氨基酸序列分析表明,在NO诱导的EC109中可能存在着一种结构异常的ATP-8肽链(一条在N端被截短的只有11个氨基酸残基的肽链,而正常的ATP-8肽链为68个氨基酸残基).这些研究结果为深入揭示NO对肿瘤细胞的作用机制提供了新的重要线索.