换一批重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用
Preparation of Recombinant ETIa and Its Application in Purification for tPA Deletion Variant (NTA)
摘要将基因工程菌株E.coli BL21(DE3) pET22b-mETIa高密度发酵,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa)蛋白在E.coli 中得到较高水平表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上.经菌体破碎、包涵体变性、复性,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白.测得rETIa对t-PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki为8.72×10-8 mol/L.据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa-Sepharose 4B亲和层析柱.直接一步纯化NTA复性液,纯化的NTA纯度达90 %以上,收率为96.2 %,纯化倍数为13.2,比活为(565.7±71.3) U/μg.
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DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2002.03.019
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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