换一批
换一批黑色素皮质素受体激动剂的高通量筛选模型研究
High Throughput Screening Method of Identifying Agonist for Melanocortin 4 Receptor
摘要为了建立黑色素皮质素受体(MC4R)激动剂的高通量筛选方法,将人的MC4R基因质粒(hMC4R/pCDNA3.1)与报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC)按1∶ 5的比例共转染到HEK293细胞,通过G418筛选,建立了稳定的MC4R激动剂筛选细胞株.利用MC4R内源激动剂α-MSH探索和优化了每孔接种细胞数目、激动剂孵育时间、溶剂DMSO终浓度、荧光素酶底物浓度等筛选条件,建立了可靠的筛选方法.实验表明:当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8 h,每孔DMSO终浓度小于1%和α-MSH终浓度为1 μmol/L时,系统Z'-因子接近0.7,能够用于MC4R激动剂的高通量筛选.
更多相关知识
主题词
高通量筛选分析(High-Throughput Screening Assays)基因, 报告(Genes, Reporter)研究(Research)方法(Methods)质粒(Plasmids)
分类号
R965
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2004.01.004
发布时间
2004-03-12
基金项目
重庆市科委资助项目（渝科发计字[2002]1号）；
重庆市计委高新技术项目（渝计委计[2001]1192号）
- 浏览224
- 被引5
- 下载6
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
