换一批人心肌肌钙蛋白I-C融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化
Expression of Human Cardiac Troponin I-C in E.coli and Its Purification
摘要提取人心肌组织总RNA,RT-PCR扩增出人心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和肌钙蛋白C(TnC)基因,利用人工合成的可编码19个中性氨基酸残基为主的DNA序列(Linker),将cTnI和TnC基因连接,插入到质粒pET15b中,将鉴定正确的重组pET15b质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达.结果在大肠杆菌中成功实现了全长cTnI-C融合蛋白(cTnI-linker-TnC)的稳定可溶性高表达,在摇瓶中表达量可达21 mg/L利用目的蛋白N端的组氨酸"标签"(His-tag),经一步Ni2+-Sepharose柱亲和层析纯化,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯蛋白质.经初步研究,cTnI-C具有较好的免疫原性和稳定性,有望成为cTnI测定系统可溯源的候选参考物质,推进cTnI检测的标准化进程.
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