换一批噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选
Phage Display of Recombinant Human Lymphotoxin Mutation Libraries and Receptor Affinity Screening
摘要淋巴毒素(lymphotoxin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相化TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体.随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80%的克隆与TNFR1受体特异性结合,有4个克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT.将这4个结合力高的突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与TNFR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30%,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90%.应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.
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栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2005.01.012
发布时间
2005-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划（863计划）（2001AA215051,2002AA223309）
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