换一批
换一批牛分枝杆菌MPB63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
Cloning and Expression of Mycobacterium bovis Secreted Protein MPB63 in E.coli
摘要以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB63成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约400 bp的DNA片段.通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-63.以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-63和pET28a(+),并将纯化的MPB63基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达载体pET28a-63.将pET28a-63转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可见约18 ku外源蛋白带.蛋白质印迹分析发现,该蛋白质具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB63的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础.
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栏目名称
研究报告
DOI
10.3321/j.issn:1000-3282.2005.02.006
发布时间
2005-03-24
基金项目
中国科学院资助项目
国家科技攻关项目
吉林农业大学校科研和教改项目
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